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样本分组名 与 样本编号 只能是英文字母, 或与数字、下划线的组合, 且 纯数字 不能单独作为名称;
样本类型, 如: plasma,tissue(中文输入请双击单元格支持粘贴操作); 样本量，如 200 mL, >100 μg
Step 3
请选择比较组信息
-
由于部分仪器无法识别中文，因此样本编号以
英文
为主, 或与数字，下划线的组合，不含有其他特殊字符(例如：case_1)，也不能是纯数字；
样本类型 指血浆、血清、粪便、组织等名称；
样本量 根据样本类型填写重量、体积或细胞计数等；
物种来源 根据样本的宿主来源填写，如人、大鼠、小鼠、兔子等；
样品预处理过程中采用的所有有机试剂要求进口色谱纯级别，实验用水要求超纯水。 -
采用双层泡沫盒密封包装样本，盒中加入足量的干冰。
夏季每天需要4 kg以上干冰，冬季每天需要3 kg以上。
以北京-南京为例，顺丰2天运输时间，夏季需要8公斤，冬天需要6公斤左右。 -
如用EP管存储运输样本时，尽量使用优质EP管或者冻存管，以保证良好的密闭性，防止液体外溢或是混入杂质。
（推荐品牌：Eppendorf，Axygen，Nest，DSP，Corning ppendorf等）
所有EP管务必使用足量的封口膜缠好，以防液体外溢；样品标记务必使用油性记号笔，标示清晰，同时尽量标识多处 - 务必使用足量的缓冲材料包裹样品，避免低温运输过程中样本管碰撞导致破裂
血浆
每个样本100~200 μL
(1) 血液收集到有抗凝剂的采血管内（推荐用EDTA抗凝剂）；
(2) 轻轻混匀，1000 g离心10~15 min，避免溶血；
(3) 移取澄清上层血浆到新的离心管内，每管均为100到200 μL；
(4) 分装完成后样品保存在-80℃冰箱，避免反复冻融。
注意事项：
(1) 采集和混匀后，血液应该放入冰水中直到离心。如果不具备冰水环境，建议室温的暴露时间不超过1 h，在4℃放置的时间不应超过4 h；
(2) 为了避免溶血现象，血液样品应该轻柔处理，不建议高速和长时间离心。
血清
每个样本100~200 μL
(1) 收集全血至不含抗凝剂的离心管或真空采血管（红色头盖）中；
(2) 全血一般在一小时内凝结，我们建议血液在室温下放置半小时，然后在4℃下放置半小时，以达到凝固目的，同时避免在室温下长时间暴露；
(3) 将上层淡黄色血清转移到新离心管，每管均为100到200 μL；
(4) 分装完成后样品保存在-80℃冰箱，避免反复冻融。
组织
（人） 每个样本20~50 mg，约黄豆大小
(1) 临床切除组织后立刻或30 min内将目标组织切成小块（20~50 mg）；
(2) 用4℃ PBS缓冲液冲洗样品去除血液和其他污染物；
(3) 样品转移到离心管或冻融管后，迅速放入液氮中淬灭；
(4) 样品管保存在-80℃冰箱（1年内），避免反复冻融。
注意事项：
(1) 癌组织要根据病理结果切块，癌旁组织至少要远病灶2 cm。
（啮齿动物）每个样本20~50 mg，约黄豆大小
(1) 麻醉完成后进行组织采集；
(2) 切除组织后立刻或30 min内将目标组织切成小块（20~50 mg），用4℃ PBS缓冲液冲洗样品去除血液和其污染物；
(3) 样品转移到离心管或冻存管后，迅速放入液氮中淬灭；
(4) 样品管保存在-80℃冰箱（1年内），避免反复冻融。
尿液
（人） 每个样本500 μL
(1) 按照常规临床操作采集晨尿的中段尿，于4℃临时保存（不得超过8 h），注意避免细菌污染；
(2) 在4℃下1000 g离心5 min；
(3) 上清转移到干净的离心管，每管均为500 μL；
(4) 分装完成后样品保存在-80℃冰箱，避免反复冻融。
注意事项：
(1) 尿液收集前，注意对饮食的控制；
(2) 样品采集到放入-80℃冰箱的时间间隔尽可能统一；
(3) 临时保存时间不可太久。
（啮齿动物）每个样本500 μL
(1) 采集容器加入抗菌剂如叠氮化钠（0.05~0.1%）；
(2) 将采集容器置于冰或干冰上；
(3) 按照说明，用代谢笼装置采集尿液，于4℃临时保存（不得超过8 h）；
(4) 在4℃ 1000 g下离心5 min；
(5) 上清转移到干净的离心管，每管均为500 μL
(6) 分装完成后样品保存在-80℃冰箱，避免反复冻融
注意事项：
(1) 动物样品采集过程要注意，防止食物残渣落入收集管引起污染；
(2) 样品采集到放入-80℃冰箱的时间间隔尽可能统一；
(3) 临时保存时间不可太久。
生物体液（唾液，脑脊液等）
每个样本100~200 μL
(1) 按照常规临床操作采集生物体液；
(2) 生物体液在4℃下1000 g离心5 min；
(3) 上清转移到干净的离心管，每管均为100到200 μL；
(4) 分装完成后样品保存在-80℃冰箱，避免反复冻融。
贴壁细胞
每个样本5×106个细胞
(1) 快速移除培养液并用预冷5.0 mL PBS轻轻冲洗细胞两次；
(2) 将培养皿迅速放入-80℃中淬灭代谢；
(3) 取出培养皿，室温下解冻1 min，向培养皿中加入1000 μL-20℃预冷的甲醇，用细胞刮铲将细胞刮下，移入1.5 mL离心管；
(4) 保存在-80℃冰箱，避免反复冻融；
(5) 干冰邮寄。
悬浮细胞
每个样本5×106个细胞
(1) 4℃，1000 g，离心5 min，收集悬浮细胞；
(2) 用预冷的PBS快速清洗2-3次，每次4℃，1000 g，离心1 min，弃上清；
(3) 收集细胞沉淀于1.5 mL进口离心管中，速冻，干冰邮寄。
细胞分泌蛋白
每个样本10 mL
(1) 培养细胞去除旧培养基，用PBS清洗2~3遍，然后加入无血清培养基（无血清，Gibco）继续培养一段时间；
(2) 根据实验设计或细胞培养状态选择合适时间收集细胞上清；
(3) 4℃，1000 g，离心10 min去除细胞，收集上清；
(4) 4℃，10000 g，离心10 min去掉细胞碎片，取10 mL上清分装到离心管中，-80℃冻存，干冰邮寄。
注意事项：
(1) 收集细胞上清液前，细胞培养基必须使用无血清培养基，避免血清干扰；
(2) 细胞需无衣原体、支原体及其他微生物污染，否则可能会影响后续数据质量。
粪便
每个样本100~500 mg（人）；每个样本50~100 mg（啮齿动物）
(1) 人：粪便排出后尽快收集中后段、内部的样品到有标签的容器内；
啮齿动物：拎尾法或代谢笼一次性采集足够新鲜粪便样品；
(2) 样品等量分装，每管均为100~500 mg（人）或50~100 mg（啮齿动物）；
(3) 分装完成后样品保存在-80℃冰箱，避免反复冻融。
注意事项：
(1) 采集容器和采集过程避免污染；
(2) 室温暴露时间尽可能短并且一致；
(3) 样品储藏时间不可太久。
外泌体
外泌体（贴壁细胞外泌体）
每个样本建议量≥100 mL，最低量50mL
(1) 细胞如T75长至90%左右，将T75中的细胞接种至15 cm的培养皿中，加完全培养基培养（含血清）15 mL；
(2) 生长至80%左右，弃掉培养基；
(3) 用无菌生理盐水洗两次，换无血清培养基（无血清，Gibco）；
(4) 收集上清至50 mL离心管，4℃依次以如下的转速和时间离心，500 g×10 min，2000 g×20 min，12000 g×30 min，取上清，转移至50 mL离心管中；
(5) 分装完成后样品保存在-80℃冰箱，避免反复冻融；
(6) 干冰邮寄。
外泌体（悬浮细胞）
每个样本建议量≥100 mL，最低量50 mL
(1) 与贴壁细胞相类似，震荡培养，会提高细胞密度及外泌体产量。
外泌体（血浆）
每个样本500 μL
(1) 血液收集到有抗凝剂的采血管内（推荐EDTA抗凝剂）；
(2) 轻轻混匀，1000 g离心10~15 min，避免溶血；
(3) 移取澄清上层血浆到新的离心管内。每管均为500 μL；
(4) 分装完成后样品保存在-80℃冰箱，避免反复冻融；
(5) 干冰邮寄。
注意事项:
(1) 采集和混匀后，血液应该放入冰水中直到离心。如果不具备冰水环境，建议室温的暴露时间不超过1 h，在4℃放置的时间不应超过4 h；
(2) 为了避免溶血现象，血液样品应该轻柔处理，不建议高速和长时间离心。
外泌体（血清）
每个样本500 μL
(1) 按照操作说明用不含抗凝剂的离心管或真空采血管（红色头盖）收集全血；
(2) 全血一般在一小时内凝结，我们建议血液在室温下放置半小时，然后在4℃下放置半小时，以达到凝固目的，同时避免在室温下长时间暴露；
(3) 将上层淡黄色血清转移到新离心管，每管均为500 μL；
(4) 分装完成后样品保存在-80℃冰箱，避免反复冻融；
(5) 干冰邮寄。
注意事项:
(1) 外泌体实验推荐用血浆样品，因血清在凝结过程中会释放外泌体。
蛋白质组学样本要求：
(1) 无盐：（少量挥发性盐不影响（如100mM一下碳酸氢铵），充分脱盐。
(2) 无聚合物：如PEG(避免使用国产耗材，避免手套等接触样品）
(3) 无表面活性剂：如SDS（前处理过程中避免使用）
血浆
每个样本100~200 μL
(1) 血液收集到有抗凝剂的采血管内（推荐用EDTA抗凝剂），上下颠倒混匀8~10次；
(2) 4℃ 1500-2000×g 离心10min，取上清，避免溶血；
(3) 用移液器将血浆转移到离心管中，加入蛋白酶抑制剂，混匀，瞬时离心；
(4) 将上清转移至离心管中，每管均为100到200 μL； 分装完成后液氮速冻5min，保存在-80℃冰箱，避免反复冻融。
注意事项：
(1) 采集和混匀后，血液应该放入冰水中直到离心。如果不具备冰水环境，建议室温的暴露时间不超过1 h，在4℃放置的时间不应超过4 h；
(2) 为了避免溶血现象，血液样品应该轻柔处理，不建议高速和长时间离心。
血清
每个样本100~200 μL
(1) 收集全血至不含抗凝剂的离心管或真空采血管（红色头盖）中；
(2) 血液在4℃下放置30-60min让全血凝结，然后在4℃下放置半小时，以达到凝固目的，同时避免在室温下长时间暴露；
(3) 4℃ 1500-2000×g离心10min,取上清；将上层淡黄色血清转移到新离心管，加入蛋白酶抑制剂，混匀，瞬时离心；
(4) 将上清转移至离心管中，每管均为100到200 μL； 分装完成后液氮速冻5min，保存在-80℃冰箱，避免反复冻融。
组织
（人） 每个样本50~100 mg，约黄豆大小
(1) 临床切除组织后立刻或30 min内将目标组织切成小块（50~100 mg）；
(2) 用4℃ PBS缓冲液冲洗样品去除血液和脂肪、结缔组织等其他污染物；
(3) 样品转移到离心管或冻融管后，迅速放入液氮中淬灭；
(4) 样品管保存在-80℃冰箱（1年内），避免反复冻融；
(5) 干冰邮寄。
（啮齿动物）每个样本20~50 mg，约黄豆大小
(1) 麻醉完成后进行组织采集；
(2) 切除组织后立刻或30 min内将目标组织切成小块（50~100 mg），用4℃ PBS缓冲液冲洗样品去除血液和其污染物；
(3) 样品转移到离心管或冻存管后，迅速放入液氮中淬灭；
(4) 样品管保存在-80℃冰箱（1年内），避免反复冻融。
(5) 干冰邮寄。
注意事项：
(1) 癌组织要根据病理结果切块，癌旁组织至少要远病灶2 cm。
尿液
（人） 每个样本500 μL
(1) 按照常规临床操作采集晨尿的中段尿，于4℃临时保存（不得超过8 h），注意避免细菌污染；
(2) 在4℃下1000 g离心5 min；
(3) 上清转移到干净的离心管，每管均为500 μL；
(4) 分装完成后样品保存在-80℃冰箱，避免反复冻融。
注意事项：
(1) 尿液收集前，注意对饮食的控制；
(2) 样品采集到放入-80℃冰箱的时间间隔尽可能统一；
(3) 临时保存时间不可太久。
（啮齿动物）每个样本500 μL
(1) 采集容器加入抗菌剂如叠氮化钠（0.05~0.1%）；
(2) 将采集容器置于冰或干冰上；
(3) 按照说明，用代谢笼装置采集尿液，于4℃临时保存（不得超过8 h）；
(4) 在4℃ 1000 g下离心5 min；
(5) 上清转移到干净的离心管，每管均为500 μL
(6) 分装完成后样品保存在-80℃冰箱，避免反复冻融
注意事项：
(1) 动物样品采集过程要注意，防止食物残渣落入收集管引起污染；
(2) 样品采集到放入-80℃冰箱的时间间隔尽可能统一；
(3) 临时保存时间不可太久。
唾液
每个样本≥500 μL
(1) 按照常规临床操作采集生物体液；
(2) 生物体液在4℃下1000 g离心5 min；
(3) 上清转移到干净的离心管，每管均为100到200 μL；
(4) 分装完成后样品保存在-80℃冰箱，避免反复冻融。
贴壁细胞
每个样本建议量1×106个细胞，最低量5×105个细胞
(1) 细胞培养至覆盖度70-90%；去培养基，培养皿用PBS洗3次，培养皿倒扣，将液体控干；
(2) 培养皿置于冰上，胰蛋白酶消化后，加入1 mLPBS悬浮细胞；
(3) 转移到新的进口1.5 ml离心管；
(4) 4℃，1000 g离心5 min，去除PBS；
(5) 保存在-80℃冰箱，避免反复冻融，干冰邮寄。
悬浮培养细胞
每个样本建议量≥100 mL，最低量50mL
(1) 4℃，1000 g，离心5 min，收集悬浮细胞；
(2) 用预冷的PBS快速清洗2-3次，每次4℃，1000 g，离心1 min，弃上清；
(3) 收集细胞沉淀于1.5 mL进口离心管中，速冻，干冰邮寄。
细胞分泌蛋白
每个样本建议量≥100 mL，最低量 50mL
(1) 培养细胞去除旧培养基，用PBS清洗2~3遍，然后加入无血清培养基（无血清，Gibco）继续培养一段时间；
(2) 根据实验设计或细胞培养状态选择合适时间收集细胞上清；
(3) 4℃，1000 g，离心10 min去除细胞，收集上清；
(4) 4℃，10000 g，离心10 min去掉细胞碎片，取10 mL上清分装到离心管中，-80℃冻存，干冰邮寄。
注意事项：
(1) 收集细胞上清液前，细胞培养基必须使用无血清培养基，避免血清干扰；
(2) 细胞需无衣原体、支原体及其他微生物污染，否则可能会影响后续数据质量。
外泌体
外泌体（贴壁细胞外泌体）
每个样本建议量≥100 mL，最低量50 mL
(1) 细胞如T75长至90%左右，将T75中的细胞接种至15 cm的培养皿中，加完全培养基培养（含血清）15 mL；
(2) 生长至80%左右，弃掉培养基；
(3) 用无菌生理盐水洗两次，换无血清培养基（无血清，Gibco）；
(4) 收集上清至50 mL离心管，4℃依次以如下的转速和时间离心，500 g×10 min，2000 g×20 min，12000 g×30 min，取上清，转移至50 mL离心管中；
(5) 分装完成后样品保存在-80℃冰箱，避免反复冻融；
(6) 干冰邮寄。
外泌体（悬浮细胞）
每个样本建议量≥100 mL，最低量50 mL
(1) 与贴壁细胞相类似，震荡培养，会提高细胞密度及外泌体产量。
外泌体（血浆）
每个样本建议量1 mL，最低量300 μL
(1) 血液收集到有抗凝剂的采血管内（推荐EDTA抗凝剂）；
(2) 轻轻混匀，1000 g离心10~15 min，避免溶血；
(3) 移取澄清上层血浆到新的离心管内。每管均为500 μL；
(4) 分装完成后样品保存在-80℃冰箱，避免反复冻融；
(5) 干冰邮寄。
注意事项:
(1) 采集和混匀后，血液应该放入冰水中直到离心。如果不具备冰水环境，建议室温的暴露时间不超过1 h，在4℃放置的时间不应超过4 h；
(2) 为了避免溶血现象，血液样品应该轻柔处理，不建议高速和长时间离心。
外泌体（血清）
每个样本建议量1 mL，最低量300 μL
(1) 按照操作说明用不含抗凝剂的离心管或真空采血管（红色头盖）收集全血；
(2) 全血一般在一小时内凝结，我们建议血液在室温下放置半小时，然后在4℃下放置半小时，以达到凝固目的，同时避免在室温下长时间暴露；
(3) 将上层淡黄色血清转移到新离心管，每管均为500 μL；
(4) 分装完成后样品保存在-80℃冰箱，避免反复冻融；
(5) 干冰邮寄。
注意事项:
(1) 外泌体实验推荐用血浆样品，因血清在凝结过程中会释放外泌体。
脑脊液/关节液
每个样本建议量：≥100 μL，最低量60 μL
(1) 1000g-2000×g离心5min,使用0.22um，滤膜过滤，取上清，液氮速冻5min,-80℃保存，干冰寄送；
细胞上清液
建议量50 mL，最低量30 mL
(1) 在收集前改用不完全培养基培养，即用不加血清的培养基进行培养；
(2) 待细胞铺满80%左右，用移液枪吸取上清；
(3) 4℃，6000rpm离心5min,弃去底部可能出现的固体沉淀；
(4) 液氮速冻5min,冻存在-80℃，干冰寄送。
细菌/真菌
每个样本建议量200 mg或1×107个，最低量100 mg
(1) 细菌收集方法是，离心弃上清，收集沉淀后用PBS冲洗数次后，用液氮冷却，置于-80℃储藏；
(2) 真菌一般都是以菌株形态存在，不需要溶液介质，所以用PBS洗净后即可放入管中。用液氮冷却，置于-80℃储藏；
(3) 干冰寄样。
修饰蛋白质组学样本要求：
(1) 无盐：（少量挥发性盐不影响（如100mM一下碳酸氢铵），充分脱盐
(2) 无聚合物：如PEG（避免使用国产耗材，避免手套等接触样品）
(3) 无表面活性剂：如SDS（前处理过程中避免使用）
人组织
样本用量：
(1) 磷酸化：建议量200 mg，最低量10 mg
(2) 乙酰化：建议量500mg，最低量50 mg
(3) 泛素化：建议量500mg，最低量50 mg
送样要求：
(1) 癌组织要根据病理结果切块，癌旁组织至少要远病灶2 cm。临床切除组织后立刻或30 min内将目标组织切成小块（50~100 mg）
(2) 用4℃ PBS缓冲液冲洗样品去除血液和脂肪、结缔组织等其他污染物
(3) 样品转移到离心管或冻融管后，迅速放入液氮中淬灭
(4) 样品管保存在-80℃冰箱（1年内），避免反复冻融
(5) 干冰邮寄
动物组织
样本用量：
(1) 磷酸化：建议量200 mg，最低量10 mg
(2) 乙酰化：建议量500mg，最低量50 mg
(3) 泛素化：建议量500mg，最低量50 mg
送样要求：
(1) 麻醉完成后进行组织采集
(2) 切除组织后立刻或30 min内将目标组织切成小块（50~100 mg），用4℃ PBS缓冲液冲洗样品去除血液和其污染物
(3) 样品转移到离心管或冻存管后，迅速放入液氮中淬灭
(4) 样品管保存在-80℃冰箱（1年内），避免反复冻融
(5) 干冰邮寄
贴壁细胞
样本用量：
(1) 磷酸化：建议量3×106个细胞，最低量1×106个细胞
(2) 乙酰化：建议量1×107个细胞
(3) 泛素化：建议量1×107个细胞
送样要求：
(1) 快速移除培养液并用预冷5.0 mL PBS轻轻冲洗细胞两次
(2) 将培养皿迅速放入-80℃中淬灭代谢
(3) 取出培养皿，室温下解冻1 min，向培养皿中加入1000 μL的PBS，用细胞刮铲将细胞刮下，移入1.5 mL离心管
(4) 刮下的细胞在4℃下1000 g离心5 min，弃去全部上清，保留沉淀
(5) 保存在-80℃冰箱，避免反复冻融
悬浮细胞
样本用量：
(1) 磷酸化：建议量3×106个细胞，最低量1×106个细胞
(2) 乙酰化：建议量1×107个细胞
送样要求：
(1) 4℃，1000 g，离心5min，收集悬浮细胞
(2) 用预冷的PBS快速清洗2-3次，每次4℃，1000 g，离心1min，弃上清
(3) 收集细胞沉淀于1.5mL进口离心管中，-80℃速冻，干冰邮寄
细菌/真菌
样本用量：
(1) 磷酸化：建议量100 mg或3×106个细胞，最低量10mg
(2) 乙酰化：建议量2g
(3) 泛素化：建议量2g
送样要求：
(1) 细菌收集方法是，离心弃上清，收集沉淀后用PBS冲洗数次后，用液氮冷却，置于-80℃储藏
(2) 真菌一般都是以菌株形态存在，不需要溶液介质，所以用PBS洗净后即可放入管中。用液氮冷却，置于-80℃储藏
(3) 干冰寄样
定性蛋白质组学样本要求：
(1) 无盐：（少量挥发性盐不影响（如100mM一下碳酸氢铵），充分脱盐
(2) 无聚合物：如PEG(避免使用国产耗材，避免手套等接触样品）
(3) 无表面活性剂：如SDS（前处理过程中避免使用）
(4) IP洗脱样品，推荐使用HPH EB（0.5M NH4OH,O.5mM EDTA)缓冲体系，进行最后一步蛋白洗脱，保证洗脱缓冲体系与后续的质谱实验兼容
注意事项：
(1) 凝胶在切割过程中应避免与手、灯箱或者其它污染源直接接触
(2) 在切割蛋白胶带时应尽量避免切下空白凝胶 (可能会降低酶切的消化效率和多肽的回收率)
(3) 将每个凝胶置于1.5mL微型离心管，并小心做好标签
胶点胶条
每个样本100~200 μL
(1) 送考马斯亮蓝染色后的胶点/胶条，要求条带清晰，无降解，需要客户切好对应的目的条带；
(2) 颜色非常浅的条带可取多个重复样本放一起；
(3) 考马斯亮蓝染色的条带鉴定到目标蛋白的概率高于银染。4℃保存，放入EP管中，加入去离子水浸泡，冰袋寄送。
互相作用谱（IP／Co-IP／Pull-down）
每个样本100~200 μL
(1) 方案一：IP／Co-IP／Pull-down 的蛋白洗脱液，跑 SDS-PAGE胶后，进行染色（建议考染）。将整个泳道按照轻重链切成五份，轻链重链合并为一个样本，剩下的三个样本作为独立样本。
(2) 方案二：IP／Co-IP／Pull-down的蛋白洗脱液，跑SDS-PAGE胶，不跑完整个泳道，在样本跑出分离胶 1cm后停止电泳，进行染色（建议考染），切胶送样。此方案鉴定到目标蛋白的概率降低，因为shot-gun优先检测高丰度蛋白。
(3) 方案三：送蛋白溶液，必须提供溶液成分或详细样本处理过程及试剂，蛋白总量为50 μg以上。此方案需要沟通评估。